苏云金芽孢杆菌aiiA基因表达及AiiA酶的碳纳米管固定化研究

【摘要】随着抵抗大多数抗生素的“超级细菌”的出现,开发出抵抗病原微生物的新抗生素和新策略的需求十分迫切。研究发现,很多病原微生物依赖群体感应系统,一种与细胞群体密度相关,协调感染与生存基因表达的刺激和响应的系统,意味着一个有前途的疾病控制策略-群体猝灭。我们可以利用群体感应抑制(QSI)的机制来实现抗病治疗、应用功能化的多壁碳纳米管作为酶固定化材料提高酰基高丝氨酸内酯酶的应用价值。本文中首先克隆表达出酰基高丝氨酸内酯酶(AiiA),其水解群体感应信号分子酰基高丝氨酸内酯(AHL),再利用功能化的多壁碳纳米管固定酰基高丝氨酸内酯酶,提高该酶的应用价值。通过PCR扩增苏云金芽孢杆菌BF1基因组的aiiA基因,然后插入到表达载体pET28a中,最后分子量为33kDa,在N端或C端含有六组氨酸标签的重组AiiA蛋白以包涵体的形式在大肠杆菌BL21中过量表达。包涵体AiiA用30%N-十二烷基肌氨酸钠溶解,再用0.2%PEG2000,0.2mM氧化型谷胱甘肽,1mM还原型谷胱甘肽和5ML-精氨酸复性。紫色杆菌CV026作为AHL信号分子指示菌,琼脂扩散法实验结果表明复性后的AiiA酶保持着原先的降解AHL的活性。具有低扩散性和高表面积／体积比率的多壁碳纳米管经N,N-二(羧甲基)-L-赖氨酸水合物(ANTA)修饰后作为酶的固定化材料。低浓度咪唑洗涤与高浓度咪唑洗脱实验表明含有组氨酸标签的复性AiiA蛋白与功能化的多壁碳纳米管间有特异亲和性。运用农杆菌作为生物传感器的实验结果表明多壁碳纳米管-AiiA复合物仍保留着原生AHL降解活性。
【作者】吴功政；
【导师】梁新乐；
【作者基本信息】浙江工商大学，生物化工，2013，硕士
【关键词】aiiA基因克隆与表达；包涵体纯化复性；碳纳米管修饰；AiiA酶固定化；

【参考文献】
[1]薛禹胜,郝丽丽.轨迹断面特征根对受扰轨迹最远点及动态鞍点的诠释[J].电力系统自动化,2010,12:1-7.
[2]陈云红.关于科技企业孵化器知识服务能力的案例研究[D].天津大学,公共管理,2013,硕士.
[3]张志勇.往复走丝电火花线切割机床电极丝恒张力控制研究[D].哈尔滨工业大学,机械制造及其自动化,2014,硕士.
[4]章毓.反垄断执法体制比较研究及对我国的启示[D].华东政法学院,国际法学,2004,硕士.
[5]何朝阳,曹祁,杜树旺,张英杰.基于C&P-CDIO模式的电子信息工程专业人才培养[J].高等工程教育研究,2013,02:60-63.
[6]孙亮权.UHF RFID牛耳标的设计与工艺研究[D].华中科技大学,材料加工工程,2013,硕士.
[7]崔云秀.红参中L-丙氨酸单糖苷（ADF）的合成及抗糖尿病药理活性研究[D].吉林农业大学,中药学,2012,硕士.
[8]郭丹.新型咪唑类有机二阶非线性晶体的生长及性能研究[D].山东大学,材料物理与化学,2013,硕士.
[9]张鑫.网络检索系统的设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[10]张延琪.中职学校“人本德育”实施方案的研究[D].河北师范大学,职业技术教育学,2012,硕士.
[11]郭新美,王宗花,夏建飞,张菲菲,夏延致,李延辉.多巴胺在聚亚甲基蓝/石墨烯修饰电极上的电化学行为研究[J].分析测试学报,2012,04:464-469.
[12]谢勇旗.高等职业教育专业设置研究[D].天津大学,教育经济与管理,2004,硕士.
[13]杨金光.契合与共生：文化软实力语境中的中国法治文化研究[D].兰州理工大学,马克思主义基本原理,2013,硕士.
[14]何淼.龙兴古镇形态与建筑研究[D].西南交通大学,建筑设计及其理论,2013,硕士.
[15]梁楠.国际反恐合作的中国角色分析[D].吉林大学,国际政治,2013,硕士.
[16]傅岚.在数据海洋中打捞信息数据挖掘[J].科技广场,2002,11:38-41.
[17]路慧萍,童学锋.保持隐私的决策树的生成过程研究[J].计算机应用,2005,06:1382-1384.
[18]樊葳.夏热冬冷地区围护结构节能技术及经济分析[D].浙江大学,2008.
[19]康宁.板栗疫病菌脱毒方法比较及受病毒侵染后与症状表达有关的靶标基因的克隆[D].广西大学,生物化学与分子生物学,2004,硕士.
[20]杨蓉.小学数学课堂教学中教师提问调查研究[D].内蒙古师范大学,教育（专业学位）,2013,硕士.
[21]刘丁嘉.钌催化间位磺化反应机理的理论研究[D].中国科学技术大学,有机化学,2014,硕士.
[22]汪晨子.农村土地股份制研究[D].浙江工商大学,行政管理,2013,硕士.
[23]梁庆真.基于相空间去噪的心音信号递归定量分析及识别[D].重庆大学,生物医学工程,2014,硕士.
[24]郭云山.《学记》的语文教育思想探讨[D].华中师范大学,学科教学,2013,硕士.
[25]程宁.氯沙坦钾对2型糖尿病大鼠肾脏组织IL-18和ET-1表达的影响[D].山西医科大学,内科学（专业学位）,2013,硕士.
[26]陈伟.氯沙坦对冠心病患者EPCs动员作用及改善血管内皮功能机制研究[D].辽宁医学院,内科学,2012,硕士.
[27]石晶.基于MC12311微控制器WSN中间件的设计研究及应用[D].苏州大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[28]张学举.不稳定药物的稳定型降解产物及其用于评价药物制剂的溶出/释放动力学[D].吉林大学,药物分析学,2013,硕士.
[29]刘元方,王艳丽,陈欣欣.人造纳米材料生物安全性研究进展[J].上海大学学报(自然科学版),2011,04:541-548.
[30]白吉日木吐.蒙古国全民扫盲教育研究[D].内蒙古大学,世界史,2014,硕士.
[31]张龙.侧链修饰PEDOT衍生物的制备及传感应用[D].江西科技师范大学,2014.
[32]王荣.地方政府食品安全管制研究[D].湖北工业大学,政治学理论,2014,硕士.
[33]杨转琴.汉中市土地综合承载力研究[D].长安大学,农业资源利用（专业学位）,2014,硕士.
[34]宋利霞,陶建平,冉春燕,余小红,王永健,李媛.卧龙亚高山暗针叶林不同林冠环境下华西箭竹的克隆生长[J].植物生态学报,2007,04:637-644.
[35]郭强.LA公司的伦理困境及解决对策研究[D].山东大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[36]刘晓.基于数据挖掘的湘潭移动数据业务营销策略研究[D].湘潭大学,工商管理,2011,硕士.
[37]薛颂石.建筑与建筑群综合布线系统工程设计规范内容介绍[J].电信工程技术与标准化.1996(01)
[38]刘丽.侵权法上私人妨害制度比较研究[D].对外经济贸易大学,国际法学,2014,博士.
[39]杨荔平.汉中市道路货运站场规划相关问题研究[D].长安大学,交通运输规划与管理,2013,硕士.
[40]熊高君,贺振华,张琳,阎贫,张毅祥,姜绍仁,桌碧华.多次反射可控制的波动方程共炮记录正演模拟[J].石油地球物理勘探,1998,05:583-590+706.
[41]冒九妹.基于异构信息网络的协同过滤推荐技术研究[D].苏州大学,管理科学与工程,2014,硕士.
[42]李铁克.钢铁企业MES中的预防性设备维护系统[J].冶金自动化,2003,06:51-53.
[43]李振兴,刘相华.热连轧辅传动电动机绝缘击穿故障分析[J].冶金自动化,2009,06:43-47.
[44]黄山.杂芴桥连的双β-二酮及其铕配合物的合成和发光性质的研究[D].湖南科技大学,化学,2013,硕士.
[45]徐立鸿,施建华.基于对象定量和定性信息的组合预测控制[J].自动化学报,1997,02:115-118.
[46]王凌,郑环宇,郑晓龙.不确定资源受限项目调度研究综述[J].控制与决策,2014,04:577-584.
[47]蔡霞,张森.基于自然语言理解的个性化Web挖掘及其系统设计[J].计算机系统应用,2003,06:41-43.
[48]郭盛.新型Fe_2O_3/氧化石墨烯催化剂的制备及其吸附与可见光Fenton降解有机污染物的研究[D].武汉理工大学,2013.
[49]郭竑晖,周安.将数据挖掘技术应用于教育信息挖掘的探讨[J].益阳职业技术学院学报,2005,01:70-71.
[50]王桂霞.北京市餐饮源排放大气颗粒物中有机物的污染特征研究[D].中国地质大学（北京）,大气物理学与大气环境,2013,硕士.